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　　申请号：201511026302.7
       申请人：宁波大学
       发明人：周骏 封昭 周露 陈栋

       摘要： 本发明公开了一种基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检测方法，其包括以下步骤：取银纳米粒子溶液并进行离心清洗，去除上清液，再使得到的沉积物悬浮于乙醇溶液中得到悬浮溶液；加入恩氟沙星标准样品溶液形成恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液；再将混合溶液滴加到SERS基底上，得到标准检测基片；之后测量标准检测基片的SERS光谱；检测时，提取检测物并溶解形成待检测样品溶液，将待检测样品溶液与悬浮溶液混合，接着将该混合溶液滴加到SERS基底上，得到待检测基片，测量待检测基片的SERS光谱；如果两个SERS光谱相同，则表明待检测基片中含有恩氟沙星；优点是实现了基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底对恩氟沙星的检测应用，且具有很高的检测灵敏度。        主权利要求：1.一种基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检测方法，其特征在于结合纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底对恩氟沙星进行检测，具体步骤如下：步骤一：取银纳米粒子溶液注入离心管，然后对银纳米粒子溶液进行离心清洗，接着在离心清洗结束后去除上清液，保留沉淀在离心管底部的银纳米粒子，再将银纳米粒子沉积物悬浮于质量百分浓度为50％的乙醇溶液中，得到单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液；步骤二：取步骤一中制备得到的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液，同时将纯度大于或等于98％的恩氟沙星粉末配制成浓度为0.01～5毫克/升的恩氟沙星标准样品溶液，然后将恩氟沙星标准样品溶液加入到所取的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液中混合形成恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液，再对恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液进行超声处理；步骤三：取步骤二制备得到的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液，并滴加到碳化硅砂纸SERS基底上，再在室温下干燥，得到恩氟沙星的标准检测基片；步骤四：使激光器发射的激光经聚焦后垂直照射于恩氟沙星的标准检测基片上，照射的激光经恩氟沙星的标准检测基片反射后由拉曼光谱仪接收，拉曼光谱仪显示出恩氟沙星的标准检测基片的SERS光谱；步骤五：实际检测前，提取检测物，并溶解检测物得到待检测样品溶液；然后取步骤一中制备得到的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液；接着将制备的待检测样品溶液加入到所取的单分散的均匀银纳米粒子的悬浮溶液中混合形成恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液，再对恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液进行超声处理；之后将经超声处理后的恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液滴加到碳化硅砂纸SERS基底上，再在室温下干燥，得到恩氟沙星的待检测基片；步骤六：实际检测时，使激光器发射的激光经聚焦后垂直照射于恩氟沙星的待检测基片上，照射的激光经恩氟沙星的待检测基片反射后由拉曼光谱仪接收，拉曼光谱仪显示出恩氟沙星的待检测基片的SERS光谱；然后比对恩氟沙星的标准检测基片的SERS光谱与恩氟沙星的待检测基片的SERS光谱，如果恩氟沙星的待检测基片的SERS光谱与恩氟沙星的标准检测基片的SERS光谱相同，则表明恩氟沙星的待检测基片中含有恩氟沙星，即表明检测物中含有恩氟沙星；如果恩氟沙星的待检测基片的SERS光谱与恩氟沙星的标准检测基片的SERS光谱不相同，则表明恩氟沙星的待检测基片中未含有恩氟沙星，即表明检测物中未含有恩氟沙星。
       2.根据权利要求1所述的基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检 测方法，其特征在于所述的步骤一中银纳米粒子溶液的制备过程为：a1、在室温下取分 析纯的硝酸银粉末，并溶解于去离子水中再搅拌均匀，得到质量百分浓度为0.009％～ 0.018％的硝酸银溶液；然后对硝酸银溶液进行搅拌的同时加热至沸腾；a2、将分析纯的 柠檬酸钠溶液逐滴加入到沸腾的硝酸银溶液中，并持续搅拌得到柠檬酸钠的质量百分比 为0.03％～0.06％的混合溶液，直至沸腾的混合溶液的颜色变为灰绿色后，在室温下冷 却，得到单分散的直径为25～80纳米的均匀银纳米粒子溶液。
       3.根据权利要求2所述的基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检 测方法，其特征在于所述的步骤一中银纳米粒子溶液的所取量的范围为100～500微升； 所述的步骤一中乙醇溶液的所取量的范围为25～500微升；所述的步骤二中恩氟沙星标 准样品溶液的所取量的范围为25～150微升；所述的步骤三中恩氟沙星与银纳米粒子的 混合溶液的所取量的范围为25～50微升。
       4.根据权利要求1至3中任一项所述的基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底 的恩氟沙星检测方法，其特征在于所述的步骤一中对银纳米粒子溶液进行离心清洗的转 速为5000～11000转/分钟、清洗时间为5～30分钟。
       5.根据权利要求4所述的基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检 测方法，其特征在于所述的步骤二中对恩氟沙星与银纳米粒子的混合溶液进行超声处理 的处理时间为10～30分钟。
       6.根据权利要求2所述的基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检 测方法，其特征在于所述的步骤三和所述的步骤五中碳化硅砂纸SERS基底的制备过程 为：将形状规则的碳化硅砂纸置于射频磁控溅射系统中，并控制磁控溅射系统的工作压 力为0.1～1.4帕，溅射功率为50～150瓦，并在碳化硅砂纸上沉积厚度为的银，得到以碳化硅砂纸为模板的碳化硅砂纸SERS基底。
       7.根据权利要求6所述的基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检 测方法，其特征在于所述的碳化硅砂纸的目数为240～5000目。
       8.根据权利要求1或2或6所述的基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩 氟沙星检测方法，其特征在于所述的步骤四和所述的步骤六中采集SERS光谱的积分时 间为1～10秒，照射激光的功率为3～30毫瓦，激光波长为785纳米。
       9.根据权利要求2所述的基于纳米银颗粒与碳化硅砂纸SERS基底的恩氟沙星检 测方法，其特征在于所述的步骤五中待检测样品溶液与所取的单分散的均匀银纳米粒子 的悬浮溶液的体积比为3：2；超声处理的处理时间为10～30分钟；经超声处理后的恩 氟沙星与银纳米粒子的混合溶液的所取量为25～50微升。